

2、减少损伤:避免剪刀镊子挤压、牵拉组织,选择锋利切割器械(如剃须刀片);所用器具必须清洁,使用缓冲液清洗。
4、取材位置:尽量取到目的位置,特殊标本需要定位(例如肾看肾小球,肠看神经细胞),需要尽量取到目的位置,个别需要确定取材方向(比如肌肉)的,提供的样本能让分清横纵方向,取材选择部位要准确可靠(例如肾看肾小球取皮质);若易成团或成卷的动物组织样本可以粘在滤纸上进行固定,密度比较小容易飘浮起来的组织(如肺),选择合适物品,使组织完全浸没在固定液中。
快-由于组织离体后,细胞缺氧导致溶酶体破裂而释放大量水解酶,造成组织结构的迅速降解,产生自溶现象。为了尽量保持样品的生活状态,将自溶的程度降到最低,从还有心跳与呼吸的动物体上取下样品后,组织块要争取在30秒内浸入固定液。
冷-为了降低组织和细胞内各种酶的活性,减缓细胞自溶的过程,要求在低温(0~4℃)下操作,所用固定液和器械应预冷,所有样品送样前,在固定液中浸泡不超过一周。4℃冰袋运输,在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。
轻-取材时一定注意避免镊子挤压等机械损伤,刀片要锋利避免挫伤组织。在取材过程中,由于刀片不锋利或者操作不仔细,对样品产生牵拉、挤压等现象所造成的人工损伤都将导致其细胞结构的严重变化,因此在整个取材过程中自始至终动作要小心,器械要锋利。
电镜样品邮寄处理,取材后用1.5ml离心管装满固定液封口膜封好,锡纸包裹避光处理,用泡沫盒放个冰袋邮寄,样本和冰袋尽量隔开,避免样本结冰.(武汉地区可上门取样)
1、后固定:0.1M磷酸缓冲液PB(PH7.4)配制的1%锇酸避光室温固定2h。0.1M磷酸缓冲液PB(PH7.4)漂洗3次,每次15min。
2、室温脱水:组织依次入30%-50%-70%-80%-95%-100%-100%酒精上行脱水每次20min,100%丙酮两次,每次15min。
3、渗透包埋:丙酮︰812包埋剂=1︰1 37℃ 2-4h, 丙酮︰812包埋剂=1︰2 37℃渗透过夜,纯812包埋剂37℃ 5-8h。将纯812包埋剂倒入包埋板,将样品插入包埋板后37℃烤箱过夜。
4、聚合:包埋板放于60℃烤箱聚合48h,取出树脂块备用。
5、超薄切片:树脂块于超薄切片机60-80nm超薄切片,150目方华膜铜网捞片。
6、染色:铜网于2%醋酸铀饱和酒精溶液避光染色8min;70%酒精清洗3次;超纯水清洗3次;2.6%枸橼酸铅溶液避二氧化碳染色8min;超纯水清洗3次,滤纸稍吸干。铜网切片放入铜网盒内室温干燥过夜。
7、透射电子显微镜下观察,采集图像分析。
承接模式动物整体造模、细胞培养整体造模、石蜡包埋切片、冰冻包埋切片、各类染色(HE,Masson,油红O等)、IHC、IF、WB、PCR、原位杂交、白光/荧光全景扫描、生化检测(手动生化、elisa、上机生化)、激光共聚焦(CLSM)、SEM(扫描电镜)、TEM(透射电镜)、普通病理/超微病理分析、组织芯片制作等实验外包!
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